Piégés dans une prison où chaque salle possède quatre portes mais apparemment aucune sortie, les joueurs doivent tenter de trouver la salle 25, supposée être l’issue de ce cauchemar. Mais certains d’entre eux pourraient être des gardiens de la prison, attendant le bon moment pour frapper. Dans le jeu coopératif Room 25, tous les joueurs ne cherchent pas à s’échapper de l’emprisonnement, mais qui est le traître ? À chaque tour, les déplacements des joueurs sont programmés à l’avance, ce qui exige discussion, négociation et parfois trahison. Room 25 propose cinq modes de jeu différents, allant de la coopération totale jusqu’au jeu en solitaire.